片段分选试剂盒；DNA-select Kit
可广泛应用于各类基因测序文库构建过程中的DNA片段分选，以及PCR产物净化。
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货号 |
型号 |
规格 |
价格 |
货期 |
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DSS-010 |
DNA-select Kit |
10mL |
询价 |
＜5天 |
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DSS-100 |
DNA-select Kit |
100mL |
询价 |
＜5天 |
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DSS-500 |
DNA-select Kit |
500mL |
询价 |
＜5天 |
产品描述
基于英芮诚生化科技多年自主研发生物纳米磁珠技术和丰富的DNA提取纯化技术，采用固相可逆结合（Solid-Phase Reversible Immobilization）原理，通过超顺磁性纳米磁珠和结合缓冲液的优化组合，成功开发了EnrichingBeads ® DNA-select Kit片段分选试剂盒。
本产品可广泛应用于各类基因测序文库构建过程中的DNA片段分选，以及PCR产物净化。
产品特点
* DNA片段分选
本产品应用于DNA片段分选时，可选择特定比例的磁珠结合液用量，获得不同片段范围的DNA；能够回收到的低DNA片段大小与所用（相对于样本体积）的试剂比例呈负相关。
包括：左侧分选——获取 大于目标长度的DNA片段
右侧分选——获取 100bp-目标长度的DNA片段
双向片段分选——获取 目标范围DNA片段
* PCR产物净化
本产品应用于酶促反应产物中DNA纯化时，可高效回收≥100bp的DNA，有效去除dNTP、引物二聚体、盐类、蛋白质和其它杂质。
*适合高通量
本产品既适合于手动操作，也可应用于基于自动化移液工作站的高通量文库构建工作。
* 替代简单
本产品同进口主流产品Beckman AMPure XP、GE Sera-Mag等具有相同的操作流程，无需任何条件摸索，可直接完成替代。
产品应用
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模式 |
描述 |
分选片段上限 |
分选片段下限 |
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左侧分选 Left Sided Selection |
保留大于目标长度的DNA片段 使用特定比例用量的磁珠结合液，回收大于目标长度下限值的DNA片段 |
∞ |
≥100bp的变量 |
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右侧分选 Right Sided Selection |
保留100bp - 目标长度的DNA片段 通过两轮磁珠分选，回收小于特定长度上限值的DNA片段,即： 第一轮分选，结合并丢弃大于特定长度上限值的DNA片段； 第二轮分选，结合并回收上清液中剩余的≥100bp的DNA片段。 |
>100bp的变量 |
≈100bp |
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双向片段分选 （多用于NGS文库制备） Dual Size Selection |
保留目标范围DNA片段 通过两轮磁珠分选，回收特定长度范围内的DNA片段，即： 第一轮分选，结合并丢弃大于特定长度上限值的DNA片段； 第二轮分选，结合并回收上清液中大于另一特定长度下限值的所有DNA片段。 |
变量 |
>100bp的变量 |
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PCR产物净化 PCR Clean-up |
去除dNTP、引物二聚体、盐类、蛋白质和其它杂质 使用大比例的磁珠结合液量，回收≥100bp的DNA片段 |
∞ |
≈100bp |
图1：片段分选-左侧分选流程示意图[[1]]
图2：EnrichingBeads ® DNA-select Kit左侧分选和右侧分选效果图
图3：片段分选-右侧分选流程示意图[[2]]
图4： EnrichingBeads ® DNA-select Kit片段分选实际工作图谱（使用仪器：Agilent4200 TapeStation System）
图5： EnrichingBeads ® DNA-select Kit片段分选实际工作图谱（使用仪器： Agilent 4200 TapeStation System）
[1] 示意图源引自BECKMAN COULTER SPRIselect User Guide
[2] 示意图源引自BECKMAN COULTER SPRIselect User Guide
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不用调整程序，可以完全直接替代。 尽管如此，考虑到流程的稳定性，我们建议在更换之前还是完成对照实验为宜。
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EnrichingBeads ® DNA-select Kit能够结合大片段全基因组，但是不建议用于纯化提取全基因组，尤其是对于非常大的DNA片段，该试剂盒所选用的磁珠对于大片段的DNA结合力较强，并且在结合大片段DNA时容易引起磁珠团聚，造成洗脱困难。
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琼脂糖凝胶电泳鉴定纯化效果和计算回收率，要向获得更准确的结果建议使用Agilent2100等仪器。不建议使用Nanodrop等仪器通过吸光度来计算回收率，因为溶液中的ssDNA、dsDNA、dNTP和其他杂质在260nm处均有光吸收，会影响测量和计算的准确度。
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1）EnrichingBeads ® DNA-select Kit对相同长度的dsDNA和ssDNA效果相同； 2）可用于纯化和提取gDNA，但磁珠干燥后gDNA后不易洗脱，需注意除醇挥发时间，同时，加热洗脱有助于提高洗脱效率； 3）EnrichingBeads ® DNA-select Kit原理上均可适用于DNA和RNA，但本试剂未进行RNase灭活处理，不可用于RNA。
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1） 包括EnrichingBeads ® DNA-select Kit在内，所有的磁珠法DNA分选试剂盒均不是一刀切，在50-100bp间会有少量核酸残留，若需尽量减少＜100bp的片段存在，可以使用1.5X（甚至1.2X）而不是1.8X进行纯化； 2）样品中含有乙醇、PEG、MgCl2等物质会导致磁珠吸附更小的片段，但分子克隆中酶促反应的正常MgCl2用量对其无影响。
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产物回收量由三个因素决定，即结合、清洗和洗脱。在操作中确保： 1）磁珠充分重悬均匀，且恢复室温； 2）80%乙醇需要新鲜配置； 3）清洗时勿扰动磁珠； 4）乙醇挥发时间适中； 5）洗脱体积不能过低； 6）磁吸效果和避免磁珠损失。
